电影《御姐在上》讲述了屌丝吴岩在一次酒吧夜生活中被女郎MiMi灌醉,进而误陷圈套,进入了集团大小姐唐琪的房间的故事。吴岩原本只是想在酒吧逍遥地撩妹,却没有料到会卷入这场令人匪夷所思的事件
在唐琪的房间里,吴岩酒醉欲上前动手动脚,却被唐琪玩弄于股掌之间。随后的一系列误会和情节发展,让这个普通的屌丝和高贵的大小姐之间的故事变得扑朔迷离。唐琪和她的哥哥在一次再次前往酒吧时,恰巧坐在吴岩和他的朋友三哥旁边。他们听到吴岩对他的朋友解释昨晚被揍的“真相”,谎称与MiMi因为激情受伤,唐琪不禁感到震惊和困惑。
随后,唐琪决定假扮成吴岩的女朋友,以躲避仇家的追杀。她威胁吴岩必须带她回家,并且将他卷入了一系列荒诞的情节之中。吴岩希望通过一场英雄救美的表演来赢得大小姐的芳心,但他没想到唐琪早已识破了他的伎俩。
尽管两人曾经是朝夕相处的朋友,但在一系列误会和情感的纠葛中,他们暗生情愫。然而,当唐琪的仇家再次出现,吴岩为了保护她而受伤,这一切变得更加复杂。就在关键时刻,唐琪的哥哥出现,改变了整个局面。
随后,吴岩因头部受伤而失去了记忆,唐琪觉得这或许是一个新的开始。然而,她听从哥哥的安排,离开了吴岩。吴岩似乎忘记了唐琪的存在,但当他在酒吧泡妞的时候,突然收到了一个视频,视频中是唐琪抱着一个孩子。吴岩决定去找她们,寻找属于他们的答案和幸福。